手持式葉綠素測定儀是農業、生態監測和植物生理研究中的重要工具，其測量結果的準確性直接影響實驗數據的可靠性。校準是儀器使用前的必要環節，能夠減少因環境變化、設備老化等因素引起的誤差。本文將詳細介紹校準操作的標準化流程及注意事項。

一、校準前準備工作

環境條件檢查

確保實驗室溫度穩定在20-25℃，避免強光直射和電磁干擾。相對濕度應低于60%，防止光學元件受潮。

儀器與耗材準備

原廠校準套件（含標準比色皿）

超純水（電阻率≥18.2MΩ·cm）

無水乙醇和鏡頭紙

專用校準溶液（SPAD模擬葉片或標準葉綠素溶液）

恒溫水浴鍋（控溫精度±0.5℃）

儀器預處理

開機預熱15分鐘使光源穩定，用棉簽蘸取乙醇清潔測量窗口，待完全揮發后進行下一步操作。

二、標準化校準流程

第一步：零點校準

將空白比色皿注入超純水至標線

放入測量槽并關閉遮光罩

長按CAL鍵進入校準模式，選擇"Zero Calibration"

待屏幕顯示"0.00±0.02"范圍后保存數據

第二步：標準樣品校準

將標準校準片置于測量平臺

調整探頭壓力至接觸指示燈亮起

連續測量3次取平均值，偏差應＜1.5%

輸入標準片標定值（如34.5 SPAD）

系統自動生成校正系數并存儲

第三步：動態范圍驗證

配制梯度濃度葉綠素溶液（建議0/10/30/50μg/mL）

依次測量并記錄儀器讀數

繪制標準曲線，線性相關系數R2應＞0.995

對偏離點進行二次校準修正

三、校準后驗證與維護

完成校準后需進行現場驗證：選取已知葉綠素含量的新鮮葉片，使用多點測量法（葉尖、葉中、葉基各3點）驗證數據一致性，相對標準偏差（RSD）應控制在3%以內。建議每兩周執行一次短期校準，每月使用NIST標準物質進行溯源校準。

四、常見故障處理

校準值漂移：檢查電池電壓（應＞4.8V），更換老化LED光源

重復性差：清潔光纖接頭，檢查遮光罩密封條

數值異常：重新活化標準溶液，避免溶液結晶影響

五、數據記錄規范

建立校準日志記錄以下信息：

校準日期/操作者

環境溫濕度

標準物質批號

校正前后對比數據

儀器序列號及修正系數

通過嚴格執行上述校準流程，可使測量誤差控制在±1 SPAD單位以內。建議配合國家計量院發布的JJG 1191-2023《植物葉綠素測定儀檢定規程》建立完整的質量控制體系，確保科研數據的溯源性。定期校準不僅能延長設備使用壽命，更是獲得可靠實驗數據的重要保障。